Question

人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中獲得．流程如下：

（1）htPA基因與載體用

 

切割后，通過DNA連接酶連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體．檢測目的基因是否已插入受體細(xì)胞DNA，可采用

 

技術(shù)．
（2）為獲取更多的卵（母）細(xì)胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其

 

．采集的精子需要經(jīng)過

 

，才具備受精能力．
（3）采用

 

將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵，然后將受精卵移入

 

中繼續(xù)培養(yǎng)得到早期胚胎．
（4）為了獲得母羊，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行

 

．利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)可獲得多個轉(zhuǎn)基因個體，這體現(xiàn)了早期胚胎細(xì)胞的

 

．
（5）若在轉(zhuǎn)ht-PA基因母羊的羊乳中檢測到

 

，說明目的基因成功表達(dá)．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),胚胎移植

專題：

分析：1、DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．
2、目的基因分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．
3、該基因工程需要對羊的性別進(jìn)行選擇，由于只有母羊能夠分泌乳汁，因此選擇母羊的胚胎進(jìn)行移植．

解答： 解：（1）htPA基因與載體需要用同種限制性核酸內(nèi)切酶（或同種限制酶）切割，形成相同的黏性末端，然后再通過DNA連接酶連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體．檢測目的基因是否已插入受體細(xì)胞DNA，可采用DNA分子雜交（或核酸探針）技術(shù)．
（2）為獲取更多的卵（母）細(xì)胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵．采集的精子需要經(jīng)過獲能（處理），才具備受精能力．
（3）將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用的方法是顯微注射法．受精卵需移入（胚胎）發(fā)育培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)得到早期胚胎．
（4）只有母羊能分泌乳汁，為了獲得母羊，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定，以選擇母羊的胚胎進(jìn)行移植．利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)可獲得多個轉(zhuǎn)基因個體，這體現(xiàn)了早期胚胎細(xì)胞的全能性．
（5）若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達(dá)．
故答案為：
（1）同種限制性核酸內(nèi)切酶（或同種限制酶）    DNA分子雜交（或核酸探針）
（2）超數(shù)排卵     獲能（處理）
（3）顯微注射法   （胚胎）發(fā)育培養(yǎng)液   
（4）性別鑒定   全能性
（5）htPA（或人組織纖溶酶原激活物）

點(diǎn)評：本題考查了基因工程和胚胎工程的相關(guān)知識，要求考生能夠識記基因工程的操作步驟，明確該基因工程中需要選擇母羊進(jìn)行胚胎移植；識記胚胎工程的相關(guān)技術(shù)及應(yīng)用，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題，屬于考綱中識記、理解層次的考查．