Question

回答下列有關基因工程的問題．
為擴大耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備受關注．我國科學家應用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系．圖1為幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖2為耐鹽基因的部分序列，圖3、圖4中箭頭表示相關限制酶的酶切位點．

（1）圖5中A-D所示的黏性末端是由

 

種限制性內切酶作用產(chǎn)生的，其中

 

所示粘性末端為用EcoRⅠ酶切后所得．
（2）圖4中限制性核酸內切酶作用于圖2中的

 

（填“a”或“b”）處，其特異性表現(xiàn)為

 

．如同時用EcoRⅠ和HindⅢ酶切外源DNA，若在每個DNA分子上至少有1個酶切位點被該酶切斷，則從理論上講，經(jīng)該酶酶切后，這些線性DNA分子最多能產(chǎn)生長度不同的DNA片段種類數(shù)是

 

．
（3）構建重組質粒時，如同時使用EcoRⅠ和HindⅢ酶，則可以形成

 

種重組質粒．
（4）如圖2耐鹽基因的片段序列可控制合成“-脯氨酸-谷氨酸-谷氨酸-賴氨酸-”的氨基酸序列，則翻譯上述多肽的mRNA是由該基因的

 

鏈轉錄的．（以圖中①或②表示）（脯氨酸的密碼子是：CCU、CCC、CCA、CCG；谷氨酸的是GAA、GAG；賴氨酸的是AAA、AAG．）
（5）由導入目的基因的水稻細胞培養(yǎng)成植株需要利用

 

技術，該技術的核心是

 

和

 

．
（6）為了確定耐鹽轉基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標記的

 

作探針進行分子雜交檢測，又要用

 

方法從個體水平鑒定水稻植株的耐鹽性．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術,植物組織培養(yǎng)的概念及原理

專題：

分析：分析圖1：圖1為幾種限制酶識別序列及其切割位點．
分析圖2：圖2為耐鹽基因的部分序列，其中a是磷酸二酯健，b是氫鍵．
分析圖3：圖3表示質粒的結構示意圖，其中箭頭表示相關限制酶的酶切位點；
分析圖4：圖4表示含有目的基因的外源DNA分子，其中箭頭表示相關限制酶的酶切位點．
分析圖5：限制酶的識別序列一般為回文序列，圖5中形成A粘性末端的限制酶的識別序列為GAATTC∥CTTAAG，形成B粘性末端的限制酶的識別序列為CAATTG∥GTTAAC，形成C粘性末端的限制酶的識別序列為GTTAAC∥CAATTG，形成D粘性末端的限制酶的識別序列為CTTAAG∥GAATTC．

解答： 解：（1）圖5中形成A粘性末端的限制酶的識別序列為GAATTC∥CTTAAG，形成B粘性末端的限制酶的識別序列為CAATTG∥GTTAAC，形成C粘性末端的限制酶的識別序列為GTTAAC∥CAATTG，形成D粘性末端的限制酶的識別序列為CTTAAG∥GAATTC，由此可見，圖5中A-D所示的黏性末端是由4種限制性內切酶作用產(chǎn)生的，其中A所示粘性末端為用EcoRⅠ酶（識別序列為GAATTC∥CTTAAG）切后所得．
（2）限制酶的作用位點是磷酸二酯健，即圖4中a處；限制酶具有特異性，即特異性的識別并切割DNA．如同時用EcoRⅠ和HindⅢ酶切外源DNA，若在每個DNA分子上至少有1個酶切位點被該酶切斷，則從理論上講，經(jīng)該酶酶切后，這些線性DNA分子最多能產(chǎn)生長度不同的DNA片段種類數(shù)是9（若只切開左側的EcoRⅠ酶的切割位點，則能形成2種不同長度的DNA片段；若只切開HindⅢ酶的切割位點，則能形成2種不同長度的DNA片段；若只切開右側的EcoRⅠ酶的切割位點，則能形成2種不同長度的DNA片段；若只切開左側EcoRⅠ酶和HindⅢ酶的切割位點，則能形成3種不同長度的DNA片段，其中有2種長度之前已經(jīng)出現(xiàn)過；若只切開右側EcoRⅠ酶和HindⅢ酶的切割位點，則能形成3種不同長度的DNA片段，其中有2種長度之前已經(jīng)出現(xiàn)過；若只切開左側EcoRⅠ酶和右側EcoRⅠ酶的切割位點，則能形成3種不同長度的DNA片段，其中有2種長度之前已經(jīng)出現(xiàn)過）．
（3）構建重組質粒時，如同時使用EcoRⅠ和HindⅢ酶，則可以形成2種重組質粒（一種含有目的基因，另一種不含目的基因）．
（4）如圖2耐鹽基因的片段序列可控制合成“-脯氨酸-谷氨酸-谷氨酸-賴氨酸-”的氨基酸序列，則根據(jù)其密碼子序列CC_GA_GA_AA_可知其轉錄的模板鏈是②鏈．
（5）將導入目的基因的水稻細胞培養(yǎng)成植株還需要利用植物組織培養(yǎng)技術，該技術的核心是脫分化和再分化．
（6）探針是被標記的目的基因的單鏈，因此為了確定耐鹽轉基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標記的耐鹽基因（目的基因）作探針進行分子雜交檢測，又要用一定濃度鹽水澆灌（移栽到鹽堿地中）方法從個體水平鑒定水稻植株的耐鹽性．
故答案為：
（1）4      A
（2）a    特異性的識別并切割DNA     9
（3）2
（4）②
（5）植物組織培養(yǎng)      脫分化（去分化）     再分化
（6）耐鹽基因（目的基因）        一定濃度鹽水澆灌（移栽到鹽堿地中）

點評：本題結合圖解，考查基因工程的相關知識，要求考試識記基因工程的原理、操作步驟、操作工具，掌握各操作步驟中需要注意的相關細節(jié)，能結合圖中信息準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．