Question

回答下列有關(guān)基因工程的問題
最新基因醫(yī)療工程主要選擇腺相關(guān)病毒（簡(jiǎn)稱AAV）作為治療用基因載體（見圖1）．AAV是有衣殼、無包膜的DNA小病毒，基因組含有病毒衣殼基因rep和復(fù)制相關(guān)蛋白基因cap，以及其他基因，但缺乏復(fù)制激活基因E，所以，AAV感染細(xì)胞后不會(huì)復(fù)制，對(duì)人體安全．當(dāng)人體細(xì)胞同時(shí)感染其他DNA病毒（含有基因E）后，會(huì)激活復(fù)制、表達(dá)，形成病毒粒子（含DNA和衣殼），病毒粒子具有侵染能力．AAV病毒衣殼不能包裝較大DNA分子．
血友病是由于基因TPO突變而不能合成凝血因子，導(dǎo)致機(jī)體出血．目前血友病的臨床治療主要有兩種基因療法，一是將基因工程菌生產(chǎn)的凝血因子注入患者體內(nèi)，補(bǔ)充凝血因子；二是用含目的基因的重組病毒感染患者，使患者獲得病毒直接提供的凝血因子．

（1）在質(zhì)粒重組之前需獲取大量的目的基因等，實(shí)驗(yàn)室最常見的方法是（寫中文全稱）

 

．
（2）過程①②需要限制酶外，還需要

 

酶．
（3）重組AAV中去除了基因rep、cap，此舉的目的是

 

；重組AAV轉(zhuǎn)染細(xì)胞產(chǎn)生病毒粒子，需要人工重組輔助質(zhì)粒，這是因?yàn)?div id="lgviwso" class='quizPutTag' contenteditable='true'> 

．
（4）比較兩種基因治療法，說出用重組AAV病毒粒子感染治療的優(yōu)點(diǎn)：

 

．
（5）實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用昆蟲細(xì)胞、酵母菌、人體細(xì)胞承擔(dān)重組質(zhì)粒與重組AAV的轉(zhuǎn)染，都能收集到凝血因子，這一現(xiàn)象說明

 

．
（6）病毒粒子可能含有重組AAV或人工重組輔助質(zhì)粒，就需要檢驗(yàn)、提純，檢驗(yàn)可以用酶切結(jié)合電泳法．已知腺相關(guān)病毒（AAV）與人體DNA片段的EcoRI與BamHI的酶切位點(diǎn)如圖2所示，兩種酶分開切的電泳圖如圖3所示

則用這兩種酶作用于重組AAV，（如圖4）電泳圖正確的是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的獲取，②基因表達(dá)載體的構(gòu)建，③將目的基因?qū)�人受體細(xì)胞，④目的基因的檢測(cè)與鑒定．

解答： 解：（1）獲取大量的目的基因的常用方法是聚合酶鏈反應(yīng)．
（2）過程①②為基因基因表達(dá)載體的構(gòu)建，需要限制酶和DNA連接參與．
（3）rep為病毒衣殼基因、cap為病毒復(fù)制相關(guān)蛋白基因，重組病毒去除這兩種基因后不能在人體大量復(fù)制，提高安全性，又因?yàn)锳AV病毒衣殼不能包裝較大DNA分子，所以去除后保證AAV能結(jié)合較大目的基因片段；由圖可知，重組AAV中沒有cap和rep基因，所以需要人工重組輔助質(zhì)粒參與提供腺相關(guān)病毒（AAV）復(fù)制所用酶以及衣殼蛋白的基因．
（4）結(jié)合圖形可知，凝血因子進(jìn)入人體內(nèi)，由于代謝而導(dǎo)致數(shù)量下降，必須不斷注射，而病毒所攜帶的目的基因能在患者體內(nèi)長(zhǎng)期生產(chǎn)凝血因子，不需要經(jīng)常注射．
（5）在不同的生物體細(xì)胞中，相同的重組AAV轉(zhuǎn)染都能獲得相同的蛋白質(zhì)，說明生物共用一套遺傳密碼．
（6）根據(jù)題意，兩種酶都使用可將重組AAV切割成四段，且總DNA片段長(zhǎng)度為1230pp，故選：B．
故答案為：
（1）聚合酶鏈反應(yīng)   
（2）DNA連接  
（3）重組AAV不能在人體大量復(fù)制，提高安全性，并保證AAV能結(jié)合較大目的基因片段        輔助質(zhì)粒能提供腺相關(guān)病毒（AAV）復(fù)制所用酶以及衣殼蛋白的基因
（4）凝血因子進(jìn)入人體內(nèi)，由于代謝而導(dǎo)致數(shù)量下降，必須不斷注射，而病毒所攜帶的目的基因能在患者體內(nèi)長(zhǎng)期生產(chǎn)凝血因子，不需要經(jīng)常注射
（5）生物共用一套遺傳密碼子
（6）B

點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程內(nèi)容，意在考查考生能從課外材料中獲取相關(guān)的生物學(xué)信息，并能運(yùn)用這些信息，結(jié)合所學(xué)知識(shí)解決相關(guān)的生物學(xué)問題．