Question

16．自然界中的微生物往往是混雜生長(zhǎng)的．人們?cè)谘芯课⑸�物時(shí)一般先要將它們分離提純，然后進(jìn)行數(shù)量的測(cè)定．下面是對(duì)大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答有關(guān)問題．步驟如下：
A．制備稀釋倍數(shù)為10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶的系列稀釋液．
B．在適宜溫度下培養(yǎng)．
（1）為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，你選用的接種方法是稀釋涂布平板法
（2）測(cè)定的大腸桿菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為10⁶的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是C．其理由是在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一般要涂布至少三個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性；為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30-300的平板計(jì)數(shù)
A．一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是53
B．兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是62和76，取平均值69
C．三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是61、35和82，取平均值59
D．四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、42、61和55，取平均值45
（3）一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為10⁶的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為43.4，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.2mL）2.17×10⁸．
（4）用這種方法測(cè)定密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量多，因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察的是一個(gè)菌落．
（5）如表是某同學(xué)測(cè)定某土壤樣品中自生固氮菌數(shù)量時(shí)配制的培養(yǎng)基配方．

培養(yǎng)基	NaNO3	K2HPO4	KCl	MgSO4	FeSO4	蔗糖	瓊脂	蒸餾水
質(zhì)量	2 g	1 g	0.5 g	0.5 g	0.01 g	30 g	15～20 g	1000 mL

有同學(xué)認(rèn)為此培養(yǎng)基配方有誤，請(qǐng)指出：培養(yǎng)基的配方中含有氮源是錯(cuò)誤的，應(yīng)將NaNO3改為不含N的鈉鹽．

Answer 1

分析 1．分離菌株的思路
（1）自然界中目的菌株的篩選
①依據(jù)：根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找．
②實(shí)例：PCR技術(shù)過程中用到的耐高溫的Taq DNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來的Taq細(xì)菌中提取出來的．
（2）實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選
①原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度．pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)．
②方法：能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素．配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌．
2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法
（1）稀釋涂布平板法（間接）
①當(dāng)樣品的稀釋庋足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌．
②通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)來推測(cè)樣品中大約含有的活菌數(shù)．
（2）利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)

解答 解：（1）根據(jù)實(shí)驗(yàn)步驟可知，實(shí)驗(yàn)中將培養(yǎng)液進(jìn)行梯度稀釋，因此選用的接種方法是稀釋涂布平板法
（2）測(cè)定的大腸桿菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為10⁶的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，由于在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一般要涂布至少三個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性；并且為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30-300的平板計(jì)數(shù)，正確可信的是C．
（3）一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為10⁶的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為43.4，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.2mL）=43.4÷0.2×10⁶=2.17×10⁸．
（4）當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察的是一個(gè)菌落，因此用稀釋涂布平板法測(cè)定密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量多．
（5）自生固氮菌可以自己將空氣的氮?dú)夤潭ǎ�而培養(yǎng)基的配方中含有氮源是錯(cuò)誤的，應(yīng)將NaNO₃改為不含N的鈉鹽．
故答案為：
（1）稀釋涂布平板法
（2）C     在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一般要涂布至少三個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)
驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性；為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30-300的平板計(jì)數(shù)
（3）2.17×10⁸
（4）多 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察的是一個(gè)菌落
（5）培養(yǎng)基的配方中含有氮源是錯(cuò)誤的，應(yīng)將NaNO3改為不含N的鈉鹽

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)、測(cè)定某種微生物的數(shù)量等知識(shí)，要求考生識(shí)記培養(yǎng)基的成分和微生物的接種方法，并能準(zhǔn)確判斷圖中的接種方法；能采用稀釋涂布平板法對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，并能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析和簡(jiǎn)單的計(jì)算．